技術(shù)文章
Technical articles
瘧疾（malaria）是瘧原蟲經(jīng)按蚊叮咬傳播的傳染病，臨床上以間歇性寒戰(zhàn)、高熱、大汗和脾大、貧血等為特征，惡性瘧疾能引起兇險(xiǎn)發(fā)作。常見檢測(cè)方法為間接熒光抗體染色法檢測(cè)瘧原蟲抗體。[檢測(cè)方法][方法學(xué)原理]抗原片上加患者血清，若血清中含有瘧原蟲抗體，即可與抗原結(jié)合成相應(yīng)的抗原抗體復(fù)合物，此復(fù)合物再與熒光標(biāo)記抗人IgG抗體結(jié)合，zui后通過(guò)熒光顯微鏡觀察熒光反應(yīng)。[試劑]1．0．01mol／LpH7．6PBS2．熒光標(biāo)記抗人IgG抗體3．陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照血清4．抗原片[檢測(cè)步驟...
對(duì)于組織培養(yǎng)中生長(zhǎng)的細(xì)胞，zui有效的裂解方法是用去污劑進(jìn)行處理。雖然有多種去污劑可用于裂解細(xì)胞，但zui常用的是TritonX—100或NP—40等非離子型去污劑。非離子型去污劑能溶解胞質(zhì)和細(xì)胞膜，破壞分子間許多微弱的結(jié)合鍵，并能溶解大部分經(jīng)常研究的蛋白質(zhì)抗原，但對(duì)于大分子多聚抗原則無(wú)效，在大多數(shù)情況下該抗原也是難以研究的。濃度介于0．1％～1％的去污劑即可滿足幾乎所有溶解需求。非離子型去污劑裂解液一般補(bǔ)充等離子濃度的鹽和接近中性的pH。在某些情況下，需要較劇烈的抽提條件以...
裂解酵母菌的方法是將玻璃微珠和菌細(xì)胞一起渦旋振蕩進(jìn)行機(jī)械破碎。此法充分利用玻璃微珠的快速轉(zhuǎn)動(dòng)撞擊酵母菌從而機(jī)械破碎裂解酵母細(xì)胞。由此可見，這是一種強(qiáng)有力的裂解方法，但在裂解過(guò)程中又傳輸大量的能量，導(dǎo)致樣本的變性。因此，和哺乳動(dòng)物細(xì)胞的研究比較，酵母菌的免疫沉淀試驗(yàn)并不是一個(gè)好的方法，特別是研究蛋白質(zhì)的性質(zhì)和結(jié)構(gòu)時(shí)，該方法是不可取的。1．準(zhǔn)備工作由于免疫沉淀有多個(gè)步驟，且包括數(shù)小時(shí)孵育，因此在實(shí)驗(yàn)開始前必須安排好時(shí)間，注意適當(dāng)利用過(guò)夜孵育的間隙。這將有助于決定何時(shí)開始裂解細(xì)胞。...
目前，我國(guó)流行的主要是乙型腦炎和森林腦炎。而在世界各地還有不同類型的病毒性腦炎流行，其病原體為各種不同的蟲媒病毒，如屬于A組病毒的東方馬腦炎、西方馬腦炎；屬于B組病毒的圣路易腦炎、波瓦生腦炎、蘇格蘭腦炎等。波瓦生腦炎波瓦生腦炎是由波瓦生腦炎病毒引起的，經(jīng)蜱傳播的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的自然疫源性疾病。潛伏期7—14d。起病急，持續(xù)高熱、頭痛，隨之出現(xiàn)中樞神經(jīng)癥狀及腦膜刺激征，部分病例出現(xiàn)肢體強(qiáng)直或偏癱。病死率高達(dá)50％，發(fā)病以兒童多見。本病分布于加拿大、美國(guó)和北歐，多發(fā)生于夏秋季，...
病毒性出血熱（viralhemorrhagicfever，VHF）是指由多種RNA病毒引起，經(jīng)嚙齒動(dòng)物或節(jié)肢動(dòng)物傳播的一組臨床綜合征，微血管損害和滲透性增加為本組疾病的基本病變，肝、心、腦、腎等器官也可受累，發(fā)熱、肌痛、出血為臨床特征。不同病種間病死率差異很大。[病因?qū)W]引起病毒性出血熱的是多種RNA病毒，其中腎綜合征出血熱和漢坦病毒肺綜合征由漢坦病毒屬病毒引起；立夫特山谷熱由白蛉熱病毒屬病毒引起；克里米亞—?jiǎng)偣鲅獰嵊杉{羅病毒屬病毒引起；拉沙熱、阿根廷出血熱和玻利維亞出血熱...
用于染色的培養(yǎng)細(xì)胞既可以是貼壁細(xì)胞，也可以是懸浮細(xì)胞。貼壁細(xì)胞通常使其生長(zhǎng)在合適的固相支持物上；懸浮細(xì)胞可以直接固定，也可以通過(guò)甩片或使用化學(xué)黏合劑黏附在固相支持物上。（一）貼壁細(xì)胞貼壁細(xì)胞的準(zhǔn)備比較簡(jiǎn)單，可以使其生長(zhǎng)于適當(dāng)?shù)妮d玻片、蓋玻片或塑料組織培養(yǎng)皿中。如果實(shí)驗(yàn)要求高分辨率或需拍照，細(xì)胞應(yīng)生長(zhǎng)于載玻片或蓋玻片上；如果實(shí)驗(yàn)的分辨率要求不高，或者是大量樣品的篩選，可使細(xì)胞生長(zhǎng)于塑料組織培養(yǎng)皿中。將貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)在固相支持物上有其*的優(yōu)點(diǎn)，操作步驟，如沖洗、固定、通透及染色均較...
處理懸浮細(xì)胞的一個(gè)簡(jiǎn)單辦法是在固定細(xì)胞之前把細(xì)胞黏附在固相支持物上。方法之一是使用甩片機(jī)。細(xì)胞在固定之前，用特殊的離心方法將細(xì)胞甩至載玻片上。需要注意的是離心力可使細(xì)胞壓癟并擴(kuò)張，使抗體更容易結(jié)合細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，但也輕微扭曲了正常的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。1．所需溶液和儀器PBS及甩片機(jī)。2．操作步驟（1）用PBS洗滌細(xì)胞（400r/min2X106／m1；離心5min），并重懸于PBS中。調(diào)整濃度至1～（2）將顯微鏡載玻片固定于甩片機(jī)的轉(zhuǎn)頭上，然后加入0．1—0．5ml細(xì)胞懸液；（3）迅速...
[器材和試劑]●包被緩沖液●PBST●PBBST[PBS，1％TritonX—100，3％BSA（Sigma）]●兔抗人Fc—特異性IgG（Pierce）：用包被緩沖液稀釋為5．0ug/ml①●HRP標(biāo)記的抗噬菌體抗體（AmershamBiosciences）：用封閉液以1/10000比例稀釋●顯色液[3，3’，5，5’—四甲基聯(lián)苯胺（TMB）液體底物系統(tǒng)，Sigma][方法]1．將200ul兔抗人Fc—特異性IgG等量分加到各孔中。4℃孵育過(guò)夜。2．用PBST洗滌多孔板。3...
當(dāng)前位置：
